Medición del GFR por DBS en modelos animales – Laboratorio de Función Renal

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Medición de la función renal en modelos animales de experimentación mediante la técnica del DBS (Dried Blood Spot)

Al igual que en humanos, en nuestro laboratorio hemos desarrollado un método simple y fiable para le medición de la función renal por aclaramiento plasmático de iohexol en modelos animales de experimentación mediante la técnica de sangre seca en papel (DBS).

En ratones, el método consiste en una única inyección intravenosa por la vena lateral de la cola del animal con una solución de iohexol en suero fisiológico (1:10) (Figura 1). El animal debe estar ligeramente sedado para evitar dolor y/o malestar y para que la inyección sea precisa.

Figure 1.A Modelo animal: ratón; Figure 1.B Inyección intravenosa en la cola del ratón

Luego, la micro-muestra se coloca en un papel de filtro especial (Whatman 903, GE Healthcare) y se deja secar durante un mínimo de 8 horas. Finalmente, el marcador exógeno iohexol es extraído por procedimientos químicos y analizado por cromatografía líquida (HPLC).

Figura 2.A Seeccionar capilar heparinizado de 5u; Figura 2.B Extracción de sangre de la cola; Figura 2.C Colocación de la muestra en papel de filtro especial (Whatman 903, GE Healthcare). Figura 2.D Capilar totalmente vacío.

La simplificación del método que hemos desarrollado nos permite mejorar el bienestar animal ya que el volumen de sangre requerido para todo el procedimiento en mínimo. Controlar el volumen sanguíneo en procedimientos con animales de experimentación de pequeño tamaño es crucial para que los resultados sean reproducibles y fiables.
Este método ha sido validado tanto en ratones^1,2 como en cerdos³, ovejas⁴ y ratas⁵.

Hemos preparado un vídeo (en tres velocidades de descarga) con los detalles del método:

Información de referencia científica del método:

Rodriguez-Rodriguez AE, Luis-Lima S, Donate-Correa J, Diaz-Martin L, Arnau MR, Jimenez-Sosa A, et al. Iohexol plasma clearance simplified by Dried Blood Spot (DBS) sampling to measure renal function in conscious mice. Sci Rep. 2021;11(1):4591.
Luis-Lima S, Rodriguez-Rodriguez AE, Martin-Higueras C, Sierra-Ramos C, Carrara F, Arnau MR, et al. Iohexol plasma clearance, a simple and reliable method to measure renal function in conscious mice. Pflugers Arch. 2016;468(9):1587-94.
Rodriguez RR, Gonzalez-Bulnes A, Garcia-Contreras C, Elena Rodriguez-Rodriguez A, Astiz S, Vazquez-Gomez M, et al. The Iberian pig fed with high-fat diet: a model of renal disease in obesity and metabolic syndrome. Int J Obes (Lond). 2020;44(2):457-65
Luis-Lima S, Garcia-Contreras C, Vazquez-Gomez M, Astiz S, Carrara F, Gaspari F, et al. A Simple Method to Measure Renal Function in Swine by the Plasma Clearance of Iohexol. Int J Mol Sci. 2018;19(1).
Carrara F, Azzollini N, Nattino G, Corna D, Villa S, Cerullo D, et al. Simplified Method to Measure Glomerular Filtration Rate by Iohexol Plasma Clearance in Conscious Rats. Nephron. 2016;133(1):62-70.